农残速测论文 篇1
关键词：农残速测,酶抑制法,问题
采用酶抑制原理进行的农残速测, 因其检测时间快、成本较低、操作简便, 是目前基层检测机构中广泛采用的农药残留检测方法。目前蓝田县农检中心采用厦门绿洲农残速测仪, 主要工作任务就是应用农残速测仪对生产及销售环节的农产品进行例行监测和监督抽检。但是, 农残速测在实际应用中经常会出现一些结果异常现象, 以至于造成个别镇检测人员对农残速测方法的科学性及可靠性提出了质疑。笔者通过1a多的工作实践, 认为检测异常结果的出现除少数是因为仪器故障和试剂质量的原因以外, 多数原因都是由于试剂配制、检测室温度、样品前处理 (即待测液制备) 方法、操作熟练程度等因素所致。在此, 笔者对常见的检测结果异常现象产生原因及避免方法做一简单分析。
1 常见的结果异常现象
1.1 假阳性
即在6个通道的抑制率中同时出现2个或2个以上≥50%。这是经常出现的情况。
1.2 0.01%或负值
即在同时检测出的6个抑制率中同时出现2个或2个以上为0.01%。这种偶尔出现的现象。
1.3 个别通道没数值
这种现象出现几率不大。
2 可能导致检测结果异常的因素
2.1 速测仪器
目前, 蓝田县配置的12台速测仪中有3台出现某个分光光度计光源不亮的故障。当速测仪器的某个紫外光源出现故障不亮时, 则该通道会出现抑制率无数值的异常情况。
2.2 检测试剂
从农残速测的酶抑制原理可以看出, 检测所用的试剂是确保检测结果正确的关键和基础。在缓冲剂、酶、显色剂、底物这4种试剂中, 酶和底物最易出现问题。如果在工作中没有严格按照酶试剂所要求的保存温度和反应温度进行保存和使用试剂, 致使酶活性降低或失去活性, 酶在底物中不起作用, 底物不能被水解, 也因此无法与显色剂结合生成黄色。此时, 就会出现假阳性。而底物也存在自动水解的问题。
2.3 操作技术
在当抑制率出现异常结果时, 首先应先检查仪器和试剂, 在确认仪器无故障、试剂正常有效的前提下, 肯定就是我们的操作出现了问题。试剂配制是否规范, 空白对照检测值是否正确, 样品提取方法得当, 检测室的坏境温度是否合适, 样品检测和对照检测温度和时间是否一致, 检测人员操作是否熟练, 加入底物后是否迅速放入比色池, 这些都是影响检测结果的重要因素。
3 结果异常原因分析及避免办法
3.1 假阳性
当6个通道的抑制率同时有2个或2个以上≥50%, 这一般即可判定为假阳性。具体原因可从以下几方面去查找:
3.1.1 对照检测值
从农残速测的基本原理可以看出, 抑制率是样品值与空白对照值的一个比率, 故空白对照值是检测结果正确与否的关键。故出现系统性的假阳性 (即全部或多数样品是阳性) 时, 应检查对照值是否正常和准确。
3.1.2 反应温度
温度对酶的活性和稳定性影响很大, 实验室必须在恒温条件下进行, 所以, 如果实验室不能满足恒温条件时应将10min的酶反应过程放在水浴锅中进行, 故在冬季检测时都必须使用水浴锅。在夏季, 酶液在稍高温度下其活性会随着时间延长而明显下降。上午配制好的试剂, 其上午所做的对照检测值一般要比其下午的对照检测值大, 如下午进行检测没有重新作对照检测, 那么这时检测出的结果则常常会出现假阳性。所以夏季得试剂应随用随配, 每次进行检测前都必须先做出准确的对照检测值。
3.1.3 取样方法
有的果蔬其取样方法不当也会造成假阳性。如生姜、葱、蒜、韭菜、香菜、西红柿、青椒、胡萝卜等蔬菜因其本身含有对酶有影响的次生物质或叶绿素较高, 容易产生假阳性。对以上样品应使用整株浸泡法或冲洗法取样。当一组抑制率中出现2个以上抑制率为阳性时, 应检查取样方法是否得当。
3.1.4 反应时间
不同抑制时间影响酶的抑制率, 随着酶抑制时间的延长, 抑制率也随之提高。如检测结果中同时出现几个抑制率为阳性, 操作者要检查自己在实验操作过程中是否由于操作不熟练等原因导致样品加入底物后没有迅速放入比色池。
3.2 抑制率出现多个0.01%或负值
这一般是由于对照检测值小于实际值造成的系统错误。抑制率是样品值于对照值比较而得到的, 如果在作对照检测时, 由于操作不熟练加入的试剂量不准确而导致测出的对照值小于实际值, 就会出现检测出的抑制率中有多个0.01%的异常现象。在实际工作中出现这种情况时, 要重做对照。在工作中应正确掌握移液枪的使用方法, 避免溶液洗空或推液不尽导致所取溶液体积不准, 造成检测数据偏差。
3.3 个别通道无数值
农残速测论文 篇2
龚亚茹
(汉中市农产品质量安全监测检验中心，陕西汉中,723000)
摘要：介绍农残速测仪检测原理、方法要点以及使用的注意事项，为农药残留检测工作者提供参考。
关键词：农残速测仪；蔬菜；检测原理；速测方法；注意事项
农产品生产中，农药对病虫害的防治发挥着十分重要的作用，而残留在农产品中的农药又威胁着人民的身体健康，为杜绝农药残留超标的农产品流入市场，加强农残的快速检测已成为农产品日常监管的重要抓手。2010年我省农产品质量安全监管局给各市农检中心统一配送了WT-51农残速测仪，也是2011年全省首届农产品质量安全基层检测技术人员大比武指定速测仪器。通过3a来的实际检测，我们熟练掌握了该仪器的操作方法，并积累了一些经验，在此与农残检测工作者们交流。检测原理
WT-51型农残速测仪检测原理是采用酶抑制率法。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性，其抑制率与农药浓度呈正相关，正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率的大小可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。农残速测技术要点
2.1 试剂配制与保存
2.1.1缓冲液：取缓冲剂一包入烧杯，量筒量取1000 ml蒸馏水充分溶解，倒进大口塑料瓶，室温保存。
2.1.2显色剂：用移液枪加入10.5 ml缓冲液，加盖摇匀；0～4℃保存。
2.1.3酶液：用移液枪加入3.1 ml缓冲液，加盖摇匀；0～4℃保存，4d内用完。
2.1.4 底物：加入3.1 ml蒸馏水，加盖摇匀；0～4℃保存，14d内用完。1
酶粉和底物的粉剂在冷冻条件下保存，临用前配制。1瓶粉剂配制后可分成小瓶，暂时不用的储存在冷冻室中，待用和用后的试剂在0～4℃保存。酶液反复解冻会影响其活性，最多不超过2次。
2.2 样液制备
取有代表性的干净蔬菜，去掉表面泥土和烂叶，剪成1 cm碎片，用天平准确称取2.00g，放入50mL提取瓶中，加10ml缓冲液振荡2～3 min，取出提取液，静臵3min，待用。样品与缓冲液比例为1:5。
2.3 仪器操作与样品测定
2.3.1仪器预热：接通电源，仪器自检，检查样品池是否漏光及各测量通道光路的光强是否足够，自检结束后待机预热10 min，仪器工作稳定后进行测量。
2.3.2对照测定：用专用移液枪吸取缓冲液2.5ml于比色皿，依次加入0.1ml酶液和0.1ml显色剂摇匀后于37℃静臵15min（每批样品的控制时间应一致），加0.1ml底物摇匀后立即放入仪器比色池内，按对照检测键，记录反应3 min的吸光度变化值。空白对照值的吸光度变化值在0.4～0.8，才可测定样品，否则要重新做空白测定。
2.3.3样品测定：用专用移液枪吸取样品提取液2.5ml于比色皿，其它操作步骤与对照测定相同，最后按样品检测键，记录测量样品的抑制率结果和吸光度变化值。
2.3.4结果判定：测定结果以抑制率表示。根据GB／T5009．199—2003判定标准，当样品提取液对酶的抑制率≥50％时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需复检2次或者用气相色谱法进一步确定具体的农药品种和含量。3 注意事项
3.1仪器在使用过程中，更换了酶试剂或重新设臵了测量时间，必须进行“对照测量”。缓冲液的配臵一定要用蒸馏水、纯净水或去离子水，不可使用矿物质水，否则在检测过程中干扰较大，影响准确性。
3.2检测室室内温度的影响。检测室温度在20～30℃之间,使用改进后的酶,可以直接在室温下培养,22℃左右培养20 min,25℃以上培养15 min;如果室温低于20℃,必须放进37～38℃培养箱中培养[2]。
3.3 酶活性对检测结果的影响。酶是有生物活性的特殊蛋白，是检测技术成功的关键，要避免试剂污染引起酶活性的变化。在贮藏过程中
要保证其贮藏温度,尤其是酶试剂及底物要在0～4℃温度条件下保存,试剂从冰箱取出，先恢复至室温，摇匀后再使用。试剂使用时，必须遵循“只出不进”原则：即酶、显色剂、底物一旦从试剂瓶中被移取，即使暂时不需要了，也不得返回原试剂瓶中，以免污染原试剂。
3.4 待测样品放入比色池速度的影响。待测样品加入底物后,应马上摇匀放入比色池,否则影响数据的准确性。经日常实践,在小白菜样品检测中,立刻放入的抑制率为23.6%，1min后放入的抑制率为54.7%,可见,加试剂后放入测试仪的速度快慢可影响其结果准确性。
3.5 抑制率≥50％的样品，至少要重复检测2次，才能确定此样品是否合格。葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理这类样品时，可采取整株(体)浸提，避免次生物质干扰。若浸提液色素干扰严重，将浸提液移到另一个烧杯中，加入0.1～0.5g活性炭，振荡3～5min，用吸管吸取上层液至离心管，离心到上层液清澈后取出，放在离心管架上作为样液[3]。
3.6 操作失误对结果的影响。待测试液放人检测仪后若出现操作(按键)失误，必须重新取样检测，绝对不能按原程序继续进行。因为从实际操作中得出，第一次检测结果输出后再次按样品检测键，抑制率会增大10％～20％。
参考文献：