野生金莲花论文 篇1
1 药理活性
1.1 抗氧化作用
赵二劳[3]对从金莲花中提取的黄酮类成分, 以清除DPPH自由基为方法, 对金莲花中黄酮类成分的抗氧化性进行了分析比较, 与同类抗氧化剂2, 6-二叔丁基对甲酚、维生素C相比, 抗氧化能力维生素C>金莲花黄酮>2, 6-二叔丁基对甲酚.从而证明了金莲花具有抗氧化性。颜娟[4]研究金莲花总黄酮对超氧阴离子、羟自由基、DPPH清除能力与红细胞膜的保护作用。在实验中以维生素C为阳性对照, 通过对比发现金莲花总黄酮对超氧阴离子、羟自由基、DPPH清除能力与红细胞膜的保护作用的IC50值比维生素C IC50值低。证明了金莲花总黄酮具有抗氧作用。李楠[5]在自由基清除试验中, 发现精制后金莲花中黄酮类化合物比未精制的产品表现出较强的自由基清除能力, 对自由基的清除效果接近抗坏血酸的作用效果。袁丹华[6]建立D-半乳糖腹腔注射致亚急性衰老小鼠模型, 在实验中研究金莲花黄酮单体荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖的作用, 结果发现金莲花黄酮单体荭草苷和牡荆苷具有抗氧化作用。
1.2 抑菌作用
林晨通过微量稀释法将金莲花3种溶媒提取物稀释后, 分别同标准菌株培养, 最后测定最小抑菌浓度。结果发现莲花提取物对所测细菌具有不同程度的抑菌作用[7]。王凌云[8]同样也采用微量稀释法研究金莲花总黄酮及牡荆苷和荭草苷对4种革兰氏阳性菌的抑菌效果, 实验结果发现牡荆苷在对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌抑菌效果要明显优于金莲花总黄酮、荭草苷。张丽娟[9]采用纸片扩散法测定金莲花蛋白提取液对变形杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌和大肠杆菌的抑制作用。结果在实验中发现金莲花蛋白提取液在蛋白高浓度以上有显著的抑制变形杆菌和伤寒杆菌的能力, 具有中等强度的抑制产气杆菌、大肠杆菌的能力, 而对金黄色葡萄球菌没有抑制作用。
1.3 抗炎作用
金莲花自古以来就具有抗炎作用, 建立巴豆油致小鼠耳肿胀模型, 同时皮下注射方式给药, 观察金莲花中的牡荆素、荭草素、藜芦酸和金莲花苷对小鼠耳肿胀的抑制效果。实验表明, 抗炎作用均在大剂量时会产生效果, 抗炎活性牡荆素>金莲花苷>藜芦酸>荭草素[10]。苏连杰[11]把实验小鼠平均分为空白组、阳性组、水提物高、低组, 醇提物高、低组六组, 采用药理学方法对其进行小鼠耳肿胀的实验, 果表明, 同空白组相比较, 阳性组和两提高剂量组均可抑制小鼠耳肿胀 (P<0.01) , 而两提低剂量组抑制作用不明显 (P>0.05) 。刘平[12]用大鼠皮内色素渗出法、大鼠足跖肿实验、大鼠棉球肉芽肿法评价金莲花总黄酮的抗炎作用, 以阿司匹林及金莲花片为阳性对照药, 金莲花总黄酮各剂量组大鼠皮内蓝斑面积、蓝斑内色素含量, 足肿胀度和肉芽肿质量均明显低于空白对照组 (P<0.05, P<0.01) ;金莲花总黄酮作用优于金莲花片, 持续时间长于阿司匹林。
1.4 抗病毒作用
林秋凤[13]利用柱层析等色谱分离手段从金莲花中得到原金莲酸、牡荆甙和荭草甙并对这三种化合物进行抗病毒活性研究。从实验结果得知, 原金莲酸对A型流感病毒有较强的抑制作用, 而荭草甙和牡荆甙则对副流感病毒有强的抑制作用。抗病毒实验结果表明, 金莲花具有抗病毒作用。苏连杰[14]建立流感病毒感染小鼠模型, 考察了对流感病毒感染小鼠的保护作用和肺质量的影响。结果表明中、高剂量金的莲花醇提物对流感病毒感染小鼠所引起的死亡有明显的保护作用, 使小鼠病死率明显降低, 同时金莲花醇提物高剂量能明显降低流感病毒感染小鼠的肺质量, 降低肺指数。温云海[15]用金莲花的水提取液进行了抗病毒的实验研究。结果表明, 金莲花水提液用于Cox B3病毒所致的各种感染。
1.5 抗癌作用
孙黎[16]利用不同浓度金莲花中黄酮成分作用于人乳腺癌MCF-7细胞24 h后, 以CCK-8法检测其细胞增殖抑制作用和流式细胞术检测端粒酶活性。实验中发现浓度与细胞增殖抑制率、端粒酶活性均呈正比端粒酶活性均有不同程度降低。结果证明金莲花黄酮成分对人乳腺癌MCF-7细胞有明显抑制作用并降低端粒酶活性。亚硝胺是已知的化学致癌物之一, 郭青枝[17]在模拟人体胃液条件下, 从金莲花中提取黄色素, 对亚硝胺合成的阻断率及对亚硝酸钠的清除率进行测定, 结果显示, 金莲黄色素有效地阻断亚硝胺的合成同时具有清除能力, 证明金莲花黄色素具有一定的防癌作用。
2 总结与展望
至今为止, 中药金莲花广泛应用于临床制剂生产中, 金莲花临床上不仅有常用的剂型, 而且还有新技术的应用, 例如金莲花分散片、金莲花滴丸、金莲花软胶囊等等。另外, 在保健方面, 还有金莲花茶的应用。但也有不足之处, 对于金莲花的化学成份以及药理作用研究往往都局限于黄酮类成分的研究, 对于其他成分研究尚不够明确。有待于进一步研究开发。
摘要：根据近来来的文献总结归纳, 总结中药金莲花的药理活性, 为其开发利用奠定一个基础。
野生金莲花论文 篇2
关键词：人工种植；金莲花；多糖；提取工艺；药用品质；评价
中图分类号：O657.32；R284.2文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0332-02
植物多糖具有免疫调节、抗衰老、抗肿瘤、抗凝血和降血糖等作用，可作为治疗疾病的药物和保健食品。植物多糖来源广泛，毒副作用低，安全性好，无致癌作用[1-2]。金莲花为毛茛科植物金莲花（TrolliuschinensisBunge）的干燥花及其花蕾，味苦、性寒、无毒，可治口疮喉肿、浮热牙宣、耳疼目痛[3]。现代药理研究表明，金莲花具有抗菌、抗病毒等活性，用于治疗慢性扁桃体炎、感冒、发烧、急性鼓膜炎、尿路感染等其他炎症。文献报道，金莲花中主要含有黄酮类、有机酸、糖类、蛋白质等[4]。目前，对金莲花的开发研究多限于野生金莲花蛋白质、黄酮类、有机酸类化合物的提取分离和药理活性研究[5-9]，而对人工种植金莲花多糖的提取分离报道不多。随着市场需求量的不断增加，野生金莲花已远远不能满足消费者需求，近年来，各地广泛进行人工种植金莲花。试验通过测定宁夏回族自治区隆德西北中药材有限公司人工种植的金莲花多糖含量，并与野生金莲花多糖含量进行比较，判断其药用价值，为人工种植金莲花的广泛应用提供科学依据。
1材料与方法
1.1试材与前期处理
人工种植金莲花采自宁夏回族自治区隆德县西北中藥材有限责任公司种植基地；山西五台山、河北承德、长白山、内蒙古赤峰的野生金莲花购买于宁夏明德中药饮片有限公司，由注册药剂师赵建军鉴定。将试材放入恒温箱中，60℃烘干至恒质量，取出自然阴干、粉碎，过80目筛，依次用石油醚、丙酮处理2次，除去脂类和色素，再用80%乙醇处理2次，除去单糖、低聚糖苷类等物质，干燥至恒定质量，备用。
1.2主要仪器与试剂
UV-2450型紫外可见分光光度计，日本岛津公司生产；FW-177型中草药粉碎机，天津泰斯特仪器有限公司生产；XH-300A微波催化合成/萃取仪，北京祥鹄科技发展有限公司生产；pHs-2C型精密酸度计，上海雷磁仪器厂生产；RE-52A旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂生产；L-S电子天平，精度0.1mg，梅特勒-托利多仪器公司生产。苯酚、98%H2SO4、NaOH、葡萄糖、无水乙醇、CHCl3、正丁醇等，均为国内产分析纯（AR）；水为纯净水。
1.3试验方法
1.3.1标准曲线的建立取适量葡萄糖于烘箱内，105℃烘干至恒定质量[10]；精确称取10mg葡萄糖，加纯水溶解并定容到100mL，配制成0.1mg/mL的标准溶液；分别移取标准液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL于25mL具塞刻度试管中，以纯水补至2.0mL，顺序加入5%苯酚溶液1.0mL和浓硫酸5.0mL，振摇均匀，静置20min；以试剂空白为参比，在波长490nm处测定吸光度。以吸光度为横坐标（D）、葡萄糖含量为纵坐标（C），获得标准曲线方程为C=0.0833D-0.00067（r=0.9993），葡萄糖标准品在0.01～0.16mg/mL之间，与吸光度具有良好的线性关系。
1.3.2金莲花多糖的提取准确称取预处理的金莲花样品1.00g，加适量纯净水于50℃浸泡，按不同液料比、微波功率、微波辐射时间和浸泡时间等条件进行微波提取，以4000r/min离心15min，取上清液；将滤渣在同样条件下再浸提1次，合并2次所得滤液，减压浓缩；向浓缩液中加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇（V∶V=4∶1），混合20min，3500r/min离心10min，取上清液，重复5～6次，至中间无明显沉淀为止；将上清液转移到100mL容量瓶中，用纯水定容至刻度，作为供试样品溶液。
1.3.3多糖含量的测定取样品液0.1mL，置于25mL容量瓶中，按照制作标准曲线溶液的方法配制样品溶液并定容至25mL，用UV-2450型紫外可见光分光光度计测定波长490nm处吸光度，计算多糖提取量和多糖含量，计算公式为：多糖提取量（g/mL）=多糖质量浓度（mg/mL）×10-3×稀释倍数；多糖含量（%）=多糖提取量×100/金莲花样品质量。
1.3.4提取工艺研究分别考察液料比、微波辐射时间、微波功率和浸泡时间4个因素对多糖提取的影响；采用4因素3水平正交试验，对提取过程中液料比（A）、微波功率（B）、微波辐射时间（C）和浸泡时间（D）进行优化工艺研究。
2结果与分析
2.1单因素对金莲花多糖提取的影响
2.1.1料液比对多糖提取的影响称取预处理人工种植金莲花1.00g各5份，分别取料液比（g∶mL）为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30，固定微波功率400W、浸泡时间60min、微波辐射时间30min进行多糖提取。结果表明，多糖提取率开始随料液比的增大而增加，当料液比大于1∶20时，随着料液比的增大，多糖提取率反而逐渐减小；料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30时，多糖提取率依次为1.21%、1.29%、1.41%、1.39%、1.36%。这是因为随液料比增大，溶剂与原料接触充分，二者的传质作用增强，多糖的提取率增大；当液料比大于1∶20时，随料液比增大，微波功率相同条件下，提取液温度呈下降趋势，致使多糖提取得率反而下降。因此，确定金莲花多糖提取适宜的液料比为1∶20。
nlc202309032136
2.1.2微波功率对多糖提取的影响称取预处理人工种植金莲花1.00g各5份，固定微波辐射时间30min、液料比1∶20、浸泡时间60min，超声功率分别为300、350、400、450、500W进行多糖提取。结果表明，随微波功率增大，多糖提取率增大，当功率超过400W时，多糖提取率增大趋于缓慢；功率分别为300、350、400、450、500W时，多糖提取率分别为1.19%、1.46%、1.78%、1.79%、1.81%。这可能是因为随着微波功率增大，物系升温加快，固液传质速度加快，对细胞破坏作用增大，有利于多糖浸出，但功率过高，瞬间加热作用会使液体沸腾溢出。为节省能源，微波功率选取400W为宜。
2.1.3微波辐射时间对多糖提取的影响称取预处理人工种植金莲花1.00g各5份，固定微波辐射功率400W、液料比1∶20、浸泡时间60min，微波辐射时间分别为10、20、30、40、50min进行多糖提取。结果表明，多糖提取率初始随微波辐射时间的延长而增加，微波辐射时间在30min时，提取率最高，当辐射时间大于30min时，多糖提取率反而下降；微波辐射时间分别为10、20、30、40、50min时，多糖提取率分别为1.39%、1.42%、1.53%、1.51%、1.48%。这可能是因为多糖热稳定性较差，随微波辐射时间延长，部分多糖变性，使多糖提取率降低。因此，确定适宜的微波辐射时间为30min。
2.1.4浸泡时间对多糖提取的影响称取预处理人工种植金莲花1.00g各5份，固定微波辐射功率400W、液料比1∶20、微波辐射时间30min，浸泡时间分别是20、40、60、80、100min进行多糖提取。结果表明，多糖提取率随浸泡时间的延长而增加，但当浸泡时间大于60min时，随浸泡时间的延长，提取率增大明显趋于缓慢；浸泡时间分别是20、40、60、80、100min时，多糖提取率分别为0.73%、1.08%、1.86%、1.87%、1.89%。为节约时间，确定适宜浸泡时间为60min。
2.2多因素正交试验对金莲花多糖提取的影响
根据单因素试验结果，采用3水平4因素L16（34）正交试验设计（表1），确定金莲花多糖提取最优提取工艺。结果由表2可见，影响金莲花多糖提取的主要因素是微波辐射时间，各因素影响大小依次为C>B>D>A，即微波辐射时间>微波辐射功率>浸泡时间>料液比；结合单因素试验结果，确定最佳多糖提取工艺条件为A2B3C2D2，即料液比1g∶20mL、微波功率400W、微波时间30min、浸泡时间60min。
由表3可见，微波辐射下提取金莲花多糖的主要影响因素是微波辐射时间，微波功率、料液比和浸泡时间对多糖的提取无显著影响。因此，提取过程中应严格控制微波辐射时间，浸泡时间可适当缩短。
2.3验证试验
取适量粉碎后的金莲花，在正交试验所得优化提取工艺条件下进行验证试验，得到多糖提取率为2.53%（n=3）。
2.4不同产地金莲花与人工种植金莲花多糖含量比较
金莲花在我国主要分布于河北、山西、内蒙古、新疆、四川、云南、东北、陕西、甘肃、青海等省（区），山西、河北是传统的金莲花道地产地和栽培地[9]。从宁夏明德中药饮片有限公司购买河北承德、山西五台山、内蒙古赤峰、长白山产的野生金莲花，在优化提取工艺条件下进行提取，得到多糖提取率分别为2.71%、2.62%、2.54%、2.48%（n=3），与宁夏隆德人工种植的金莲花多糖提取率没有显著性差异。
3结论
利用直观法分析微波辐射下提取金莲花多糖，影响因素大小依次为微波辐射时间>微波辐射功率>浸泡时间>料液比，金莲花多糖提取最佳工艺条件为料液比1∶20、微波辐射功率400W、微波辐射时间30min、浸泡时间60min。
与河北、山西、内蒙古、长白山产野生金莲花多糖含量比较，宁夏隆德西北中药材有限公司人工种植的金莲花多糖含量与野生差异不大，完全能满足药用。不过，影响金莲花多糖含量的因素比较多，除人工种植与野生栽培方式能引起多糖含量差异之外，可能还与产地气候、采摘时间、土壤养分等因素有关。
参考文献：
[1]LeeBC，BaeJT，PyoHB，etal.BiologicalactivitiesofthepolysaccharidesproducedfromsubmergedcultureoftheediblebasidiomyceteGrifolafrondosa[J].EnzymeandMicrobialTechnology，2003，32（5）：574-581.
[2]DuXJ，ZhangJS，YangY，etal.Purification，chemicalmodificationandimmunostimulatingactivityofpolysaccharidesfromTremellaaurantialbafruitbodies[J].JournalofZhejiangUniversity-ScienceB，2010，11（6）：437-442.，
[3]（清）赵学敏，闫冰.本草纲目拾遗[M].北京：中国中医药出版社，1998：256.
[4]刘召阳，罗都强.金莲花的化学成分研究[J].中草药，2010，41（3）：370-373.
[5]张丽娟，张贵君，李仁伟.金莲花蛋白超声提取工艺优化及其抑菌活性的初步测定[J].天津中医药，2007，24（1）：63-65.
[6]朱登祥，安芳，王书华.牡荆苷对人食管癌EC-109细胞生长及凋亡的影响[J].中草药，2012，43（9）：1781-1784.
[7]AnF，YangGD，TianJM，etal.AntioxidanteffectsoftheorientinandvetixininTrolliuschinensisBungeinD-galactose-agedmice[J].NeuralRegenerationResearch，2012，7（33）：2565-2575.
[8]梁永锋.金莲花中绿原酸提取工艺的优化及其含量比较[J].湖北农业科学，2013，52（21）：5296-5298，5302.
[9]梁永锋.不同产地野生与人工种植金莲花黄酮含量的比较及提取工艺[J].江苏农业科学，2013，41（9）：253-255.
[10]董鈺明，唐兴文，张树江，等.红毛五加多糖的含量测定条件和提取工艺优选[J].中南药学，2006，4（2）：86-88.